Tampon de perméabilisation pour immunomarquage avec saponine

Cat. No.: I743382

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A conserver entre 2 et 8°C

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Glace humide

Vue d’ensemble

Le tampon de perméabilisation pour immunomarquage avec saponine peut être utilisé pour la perméabilisation d'échantillons cellulaires, de coupes congelées ou de paraffine dans des essais in situ tels que l'immunomarquage pour exposer les cibles de détection telles que les antigènes et les acides nucléiques, ce qui permet un marquage efficace de la cible par des anticorps, des sondes ou d'autres marqueurs. Ce produit a une forte perméabilité et est recommandé pour la perméabilisation des cellules dans divers essais de routine d'immunofluorescence, d'immunohistochimie, d'immunocytochimie et de cytométrie de flux, etc. Il est particulièrement adapté à la détection des protéines de la membrane cellulaire. Ce produit ne dissout pas la membrane cellulaire et n'affecte pas la diffusion de la lumière lors des essais de cytométrie de flux. Toutefois, ce produit n'est pas recommandé pour la détection des protéines nucléaires et mitochondriales. Pour les exigences de perméation faibles, le tampon de lavage d'immunomarquage d'Aladdin ou le tampon de perméabilisation d'immunomarquage avec Triton X-100 peuvent également être utilisés. Pour les exigences de perméation plus élevées, le tampon de perméabilisation d'immunomarquage amélioré peut être utilisé. La perméabilisation des membranes cellulaires est généralement réalisée à l'aide de solvants organiques tels que le méthanol et l'acétone, ou à l'aide de détergents tels que le Triton X-100 et la saponine. Les solvants organiques peuvent lyser la membrane cellulaire et la membrane nucléaire pour exposer complètement les protéines cibles dans le plasma cellulaire et le noyau, et dénaturer les protéines entre-temps en tant que fixateur. L'inconvénient est que les protéines membranaires sont également dissoutes et que certaines protéines sont dénaturées, ce qui est parfois défavorable pour les applications en aval. C'est pourquoi les solvants organiques sont rarement utilisés, sauf pour certains essais grossiers. Le Triton X-100 est un réactif perméabilisant couramment utilisé qui peut pénétrer les membranes cellulaires et nucléaires par lyse non spécifique des membranes cellulaires ; il présente donc l'inconvénient de ne pas être propice à la détection des protéines membranaires. Cependant, après réticulation et fixation avec du paraformaldéhyde, une partie importante des protéines membranaires ne sera pas lysée par le Triton X-100 et pourra être détectée par la suite. La saponine solubilise spécifiquement le cholestérol dans les membranes cellulaires et permet ainsi une perforation sélective des membranes cellulaires. Son avantage est qu'elle convient à l'examen des protéines des membranes cellulaires, en particulier les protéines de signature des membranes cellulaires par cytométrie de flux. Son inconvénient est qu'il est peu perméable aux cellules à faible teneur en cholestérol, avec une perméabilité plus faible que celle du Triton X-100 et des solvants organiques, et qu'il ne peut pas pénétrer les membranes nucléaires et mitochondriales qui ont une très faible teneur en cholestérol. Pour la détection des lectines, les solutions de perméabilisation contenant des détergents non spécifiques tels que le Triton X-100 sont nettement plus efficaces que celles contenant principalement de la saponine. Les résultats des tests d'immunomarquage des protéines membranaires des cellules cibles dans les échantillons traités avec ce produit sont fondamentalement les mêmes ou même supérieurs à ceux obtenus avec les solutions de perméabilisation conventionnelles.

Précautions：

Ce produit est réservé à la recherche et au développement. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant l'opération.

Instructions pour l'utilisation：

1. Pour les sections de tranches, après fixation et lavage, ajouter 50-100μl de ce produit par échantillon, ou perméabiliser par immersion complète dans ce produit dans un bocal de coloration. Pour les échantillons de cellules, après fixation et lavage, ajouter 1ml de ce produit par puits pour les plaques à six puits, ou se référer à ce ratio pour les cellules dans d'autres plaques multi-puits. Pour les autres échantillons, ajouter suffisamment de tampon de perméabilisation pour l'immunomarquage pour couvrir complètement les échantillons.2 La perméabilisation peut généralement être complétée par une incubation à température ambiante pendant 5-10 minutes. Pour les échantillons qui sont plus difficiles à perméabiliser ou qui nécessitent une perméabilisation complète, incuber pendant 10 à 30 minutes à température ambiante.

Spécifications

Stabilité et stockage

Conserver à 4 ℃ jusqu'à 1 an, à température ambiante jusqu'à 1 mois, ou à -20 ℃ pour un stockage à long terme.

Conditions de stockage de stockage

A conserver entre 2 et 8°C

Expédié en

Glace humide

Foire aux questions

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This product ships chilled on wet ice. Unpack on arrival and transfer it to the storage condition stated above.

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