La phosphatase protéique lambda d'Aladin est une phosphatase protéique dépendante du Mn2+ qui a une activité sur les résidus sérine, thréonine, tyrosine et histidine phosphorylés. Elle peut être utilisée pour déphosphoryler des protéines afin d'étudier la relation entre la phosphorylation des protéines et leur activité et leur structure, et pour vérifier la spécificité des anticorps dirigés contre les sites de phosphorylation des protéines. Ce produit est une phosphatase lambda recombinante avec une étiquette 6×His exprimée dans E. coli. Il s'agit du produit de 221 acides aminés du cadre de lecture ouvert ORF221 du bactériophage lambda.Définition de l'unité d'activité enzymatique
Précautions：
Des congélations répétées réduisent l'activité enzymatique de la protéine phosphatase lambda. Lorsqu'elle est conservée à -80℃, elle doit être aliquotée.Les ions vanadate à 10mM peuvent inhiber l'activité de la protéine phosphatase lambda d'environ 90%, et l'EDTA à 50mM peut inhiber l'activité de la protéine phosphatase lambda d'environ 95%. L'activité enzymatique de la protéine phosphatase lambda n'est pas affectée par 1 % de Triton X-100, 0,4 % de Nonidet P-40, 0,025 % de Tween 20, 0,5 M NaCl, 0,1 mM ATP, 10μg/ml de pepstatine A, 10μg/ml de leupeptine, 10μg/ml d'aprotinine, 0.les ions vanadate à 10mM peuvent inhiber l'activité de la protéine phosphatase lambda d'environ 90%, et l'EDTA à 50mM peut inhiber l'activité de la protéine phosphatase lambda d'environ 95%. L'activité enzymatique de la protéine phosphatase lambda n'est pas affectée par 1 % de Triton X-100, 0,4 % de Nonidet P-40, 0,025 % de Tween 20, 0,5 M NaCl, 0,1 mM ATP, 10μg/ml de pepstatine A, 10μg/ml de leupeptine, 10μg/ml d'aprotinine, 0.5mM PMSF, ou 1mM benzamidine.Ce produit a une température de réaction optimale de 30℃, et son taux de déphosphorylation varie pour différentes protéines. Lors du traitement des extraits bruts de certains échantillons avec cette enzyme, la durée du traitement doit être aussi courte que possible et une quantité appropriée d'inhibiteurs de protéase doit également être ajoutée pour minimiser la dégradation des protéines cibles.Ce produit est destiné à la R&D uniquement. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant l'opération.
Instructions pour l'utilisation：
1. L'activité de la phosphatase protéique lambda varie selon les protéines. Les concentrations enzymatiques optimales et les durées d'incubation doivent être déterminées de manière empirique pour chaque substrat protéique particulier. En plus du tampon 1X pour la protéine phosphatase lambda, il convient d'ajouter du MnCl2 dans le mélange réactionnel à une concentration finale de 1mM.2. Prenons l'exemple d'une réaction de déphosphorylation générale : dans un mélange réactionnel de 50μl, 100U de protéine phosphatase lambda peuvent éliminer environ 100 % des groupes phosphates de protéines monophosphorylées de 5μM en l'espace de 30 minutes.
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