Tampon de stockage : DMSO anhydre
Les sondes de la série LysoTracker ® sont un type de colorant fluorescent qui colore sélectivement les compartiments acides des cellules vivantes. Ces sondes présentent plusieurs caractéristiques importantes, notamment
1) le marquage sélectif des organites acides ;
2) Une concentration nanomolaire (nM) peut marquer efficacement les cellules vivantes ;
3) Équipées de sondes multicolores, plusieurs expériences standard peuvent être menées sur l'échantillon en fonction de la situation.
LysoTracker ® Structurellement composé d'un groupe fluorescent et d'un groupe de base faible connecté, il peut librement pénétrer la membrane cellulaire et s'agréger généralement sur des organites sphériques, ce qui convient à l'observation de la biosynthèse et de la pathogenèse connexe à l'intérieur des lysosomes. Le Lysotracker ne subit qu'une protonation partielle à pH neutre, de sorte que le principe du marquage des organites avec cette sonde peut être lié à sa protonation complète et à sa rétention sur la membrane de l'organite. Ce produit LysoTracker ® Green DND-26 est une sonde lysosomale marquée par une fluorescence verte, avec une longueur d'onde maximale d'excitation/émission de 504/511nm. Ce produit se présente sous la forme d'une solution de stockage de 1mM dissoute dans du DMSO anhydre.
Précautions：
1. La solubilité est mesurée à température ambiante. Une température trop basse peut affecter la solubilité.
2. Nos produits sont emballés de manière non stérile. S'ils sont utilisés pour la culture cellulaire, veuillez effectuer un prétraitement à l'avance pour éliminer les bactéries pyrogènes, sinon cela peut entraîner une contamination bactérienne.
3. Ce produit est destiné uniquement à la recherche scientifique et ne doit pas être utilisé à d'autres fins.
4. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des vêtements de laboratoire et des gants jetables pendant toute l'opération.
Mode d'emploi：
Avant utilisation, sortir le produit et le réchauffer à température ambiante, puis effectuer une brève centrifugation pour concentrer la solution de DMSO au fond du tube. La concentration optimale de travail doit être optimisée en fonction des différentes exigences expérimentales, des types de cellules, de la perméabilité de la membrane des cellules ou des tissus, etc.
1. Préparation du liquide de travail
Diluer la solution de stockage 1mM à la concentration de travail en utilisant un milieu de culture ou un tampon approprié, avec une concentration de solution de travail recommandée de 50-75nM ;
[Attention] :
1) Pour réduire la possibilité de faux positifs causés par une charge excessive de la sonde, il est recommandé d'utiliser des concentrations faibles autant que possible sans affecter l'effet de la coloration.
2) Si les cellules sont incubées dans un milieu sans colorant après la coloration, une atténuation des signaux de fluorescence et une vacuolisation des cellules seront observées.
2. Coloration
2.1 Pour les cellules adhérentes
1) Placer les cellules sur une lamelle couvre-objet dans une boîte de culture, ajouter un milieu de culture approprié et les laisser se développer sur la lamelle.
2) Une fois que les cellules ont atteint une abondance appropriée, retirer le milieu de culture et ajouter une quantité appropriée de solution de travail contenant la sonde, préchauffée à 37 ℃. Incuber pendant 30 minutes à 2 heures dans un état de croissance (le temps d'incubation spécifique dépend du type de cellule).
[Note] : Les études dynamiques sur le processus d'internalisation du Lysotracker Green DND-26 indiquent que les cellules vivantes n'ont besoin que de quelques secondes pour absorber ce colorant.
L'inconvénient est que cette sonde peut provoquer un "effet alcalin" dans les lysosomes, ce qui signifie qu'un temps d'incubation prolongé peut induire une augmentation du pH des lysosomes. Il est recommandé d'utiliser la sonde comme indicateur de pH uniquement lorsque les cellules sont incubées à 37 ℃ pendant 1 à 5 minutes.
3) Remplacer la solution de coloration ci-dessus par du milieu de culture frais et observer au microscope à fluorescence (avec le filtre approprié). Si la coloration n'est pas suffisante, il est recommandé d'augmenter la concentration de colorant ou de prolonger le temps de coloration.
2.2 Pour les cellules en suspension
1) Centrifuger et éliminer le surnageant.
2) Remettre les cellules en suspension en utilisant la solution de travail de la sonde préchauffée à 37 ℃ et incuber dans un état de croissance pendant 30 minutes à 2 heures (le temps spécifique dépend du type de cellule).
3) Centrifuger, éliminer la solution de coloration et remettre les cellules en suspension dans un milieu de culture frais.
4) Observer au microscope à fluorescence. Si la coloration n'est pas suffisante, il est recommandé d'augmenter la concentration de colorant ou de prolonger le temps de coloration.
[Note] : Les cellules en suspension peuvent également être fixées sur du verre de couverture traité avec BD Cell Tag, puis colorées en utilisant une méthode similaire à celle des cellules adhérentes.
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