Le tampon de lyse RIPA d'Aladdin est un tampon de lyse traditionnel pour la lyse rapide des cellules et des tissus. Le lysat d'échantillon obtenu peut être utilisé pour les analyses de routine PAGE, Western, IP, Co-IP et ELISA. Ce produit peut être utilisé pour lyser les échantillons d'animaux, de plantes, de bactéries et de levures. RIPA est l'abréviation de Radio Immunoprecipitation Assay (essai d'immunoprécipitation par radio). En fonction de leur capacité de lyse, les tampons de lyse RIPA sont divisés en tampons de lyse forts, moyens et faibles. Pour connaître les principales caractéristiques et comparer le tampon de lyse RIPA d'Aladdin à d'autres tampons de lyse, veuillez consulter le site Web à l'adresse suivante : https
Précautions：
Pour une meilleure performance, ce produit doit être évité les congélations-décongélations répétées. Conserver les aliquotes à -20℃.PMSF (, ST506) est nécessaire, mais n'est pas fourni dans ce produit. Des cocktails d'inhibiteurs peuvent également être utilisés pour obtenir de meilleurs résultats de lyse. fournit une variété de cocktails d'inhibiteurs, tels que le Cocktail d'inhibiteurs de protéase et de phosphatase pour usage général , le Cocktail d'inhibiteurs de protéase et de phosphatase pour usage général, MS-safe , le Cocktail d'inhibiteurs de protéase et de phosphatase pour mammifères , le Cocktail d'inhibiteurs de protéase et de phosphatase pour plantes , le Cocktail d'inhibiteurs de protéase et de phosphatase pour champignons , et le Cocktail d'inhibiteurs de protéase et de phosphatase pour bactéries . Si les protéines phosphorylées ne doivent pas être détectées, des inhibiteurs de protéase uniquement peuvent être utilisés.Toutes les procédures de lyse des échantillons doivent être effectuées sur de la glace ou à 4℃.Un tampon de lyse d'échantillon approprié peut être sélectionné en se référant au site web https://www.aladdin-e.com ou optimisé par des tests préliminaires.Ce produit est destiné à la R&D uniquement. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant l'opération.
Instructions pour l'utilisation：
1. Lyse de cellules cultivéesa. Décongeler complètement le tampon de lyse RIPA et bien mélanger. Juste avant l'utilisation, prélever une quantité appropriée de tampon de lyse RIPA et ajouter du PMSF à une concentration finale de 1mM. D'autres inhibiteurs de protéase et de phosphatase peuvent également être utilisés si nécessaire.b. Pour les cellules adhérentes : Aspirer le milieu de culture et laver les cellules une fois avec du PBS, une solution saline tamponnée ou un milieu de culture sans sérum pour éliminer les résidus de protéines qui peuvent interférer avec la lyse cellulaire. Ajouter 150-250μl de tampon de lyse pour chaque puits de cellules dans des plaques à 6 puits et pipeter de haut en bas plusieurs fois pour assurer un contact complet des cellules avec le tampon de lyse. En général, il faut 1 à 2 secondes pour lyser les cellules animales ou 2 à 10 minutes pour lyser les cellules végétales.Pour les cellules en suspension : Recueillir les cellules par centrifugation, vortexer doucement ou tapoter le fond du tube pour disperser les cellules autant que possible. Ajouter 150-250μl de tampon de lyse pour chaque puits de cellules dans des plaques à 6 puits, agiter le fond du tube pour remettre les cellules en suspension et les lyser complètement. Il ne doit pas y avoir de précipités évidents après une lyse complète. Pour de grandes quantités de cellules, les répartir en 0,5-1,0×106 cellules par tube pour la lyse. Pour les bactéries ou les levures : Recueillir les bactéries ou les levures en centrifugeant 1 ml de cultures. Aspirer le surnageant et laver le culot une fois avec du PBS si nécessaire. Après avoir retiré le surnageant, vortexer doucement ou tapoter le fond du tube pour disperser les cellules, puis ajouter 150-250μl de tampon de lyse. Après avoir remis les cellules en suspension dans le tampon de lyse, lyser les cellules sur la glace pendant 2 à 10 minutes. Pour une meilleure lyse, les bactéries ou les levures peuvent être traitées avec du lysozyme ou de la lyticase avant d'ajouter le tampon de lyse RIPA.Remarque : En général, pour un puits de cellules dans des plaques à 6 puits ou 1ml de cultures bactériennes ou de levures, 150μl de tampon de lyse suffisent. Pour des densités cellulaires plus élevées, utiliser 200-250μl de tampon de lyse. Lorsque l'on lyse 1 million de cellules animales avec 100μl de tampon de lyse, la concentration en protéines du lysat est d'environ 2-4 mg/ml, ce qui dépend du type de cellules. c. Après lyse complète des cellules, centrifuger à 10 000-14 000×g pendant 3-5 minutes et prélever le surnageant pour l'analyse PAGE, Western ou IP. 2. Lyse des tissusa. Couper les tissus en petits morceaux.b. Décongeler complètement le tampon de lyse RIPA et bien mélanger. Juste avant l'utilisation, prélever une quantité appropriée de tampon de lyse RIPA et ajouter du PMSF à une concentration finale de 1mM. D'autres inhibiteurs de protéase et de phosphatase peuvent également être utilisés si nécessaire.c. Ajouter 150-250μl de tampon de lyse pour 20mg de tissus. La quantité de tampon de lyse peut être ajustée en fonction des résultats de la lyse.d. Homogénéiser soigneusement les tissus à l'aide d'un homogénéisateur en verre ou de l'homogénéisateur portatif TissueMasterTM . e. Centrifuger à 10 000-14 000×g pendant 3-5 minutes et prélever le surnageant pour l'analyse PAGE, Western ou IP. Lors de la lyse de 20 mg de tissu de foie de souris avec 200μl de tampon de lyse, la concentration en protéines du lysat est d'environ 15-25 mg/ml, ce qui dépend de l'état des tissus.f. Pour les tissus minuscules, ajouter le tampon de lyse après une coupe appropriée et lyser les tissus avec un vortex vigoureux. Centrifuger et prélever le surnageant pour une analyse ultérieure. Cette méthode de lyse est pratique, car elle ne nécessite pas d'homogénéisation, mais le résultat de la lyse n'est pas aussi complet que celui de la méthode d'homogénéisation.Note : Il est normal de voir un petit amas de substances gélatineuses transparentes contenant de l'ADN génomique dans le lysat cellulaire RIPA. Dans les cas où les protéines de liaison à l'ADN ne seront pas analysées, le surnageant peut être analysé directement. Dans le cas contraire, il faut casser la substance gélatineuse à l'aide d'un ultrason et analyser le surnageant après centrifugation. Certains facteurs de transcription courants tels que NF-kappaB et p53 peuvent être détectés dans le surnageant sans traitement par ultrasons.Annexe：Comparaison et sélection des tampons de lyse de : Cat. Non. Composant QuantitéP0013P0013BP0013CP0013DP0013FP0013GP0013JP0013KNom du produitTampon de lyse pour Western&IPTampon de lyse RIPA Tampon de lyse RIPA (moyen)Tampon de lyse RIPA (faible)NP-40 Tampon de lyseSDS Tampon de lyseTampon de lyse pour Western&IP (sans inhibiteurs)Tampon de lyse RIPA Composant effectif1% Triton X-1001% Triton X-100, 1% désoxycholate, 0.1% SDS1% NP-40, 0,5% désoxycholate, 0,1% SDS1% NP-40, 0,5% désoxycholate 1% NP-401% SDS1% Triton X-1001% Triton X-100, 1% désoxycholate, 0.1% SDSRenforcement de la lyseDoux FortMoyenDoux FortDoux FortDoux FortExtraction des protéines membranairesJusteExcellentBienJusteExcellentJusteExcellentJusteExcellentExtraction des protéines cytosoliquesExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExtraction des protéines nucléairesBienExcellentBienExcellentBienExcellentBienExcellentExcellentExtraction des protéines phosphorylées dans le cytosolExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellence des facteurs de transcription dans le noyauExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentExcellentProtéase InhibiteursOuiOuiOuiOuiOuiNonInhibiteurs de phosphataseOuiOuiOuiOuiOuiNonCompatibilité avec les espècesHautHautHautHautHautHautHautHautApplicationsWB, IP, Co-IPWB, IPWB, IPWB, IPWB, Co-IPWB, IP, Co-IPWB, ChIPWB, IP, Co-IPWB, IPPour les essais généraux de Western, IP ou co-IP, nous recommandons d'utiliser le tampon de lyse pour Western & IP (, P0013) qui a été largement utilisé avec d'excellentes performances. La lyse des cellules avec ce tampon de lyse ne nécessite pas de traitement par ultrasons. Le lysat d'échantillon obtenu ne contient pas d'amas d'ADN gélatineux et est idéal pour les études ultérieures ainsi que pour la détection des protéines phosphorylées par Western. Pour l'IP de certaines protéines spéciales, le tampon de lyse RIPA ou le tampon de lyse NP-40 peuvent être utilisés lorsque le tampon de lyse pour Western & IP (, P0013) ne donne pas de bons résultats. Si le fond du résultat de l'IP est élevé, il convient d'utiliser un tampon de lyse plus puissant tel que le tampon de lyse RIPA. Si la protéine cible ne peut pas être immunoprécipitée, cela indique que le tampon de lyse utilisé est trop fort et qu'un tampon de lyse plus doux tel que le tampon de lyse RIPA (faible) et le tampon de lyse NP-40 doit être utilisé. Pour le Western blot de certaines protéines difficilement solubles, le tampon de lyse RIPA ou le tampon de lyse SDS peut être utilisé lorsque le tampon de lyse pour Western & IP (, P0013) ne fonctionne pas bien. Le tampon de lyse RIPA est également largement utilisé par les chercheurs et a été cité dans un grand nombre d'articles. Pour les applications spéciales où aucun inhibiteur ou un inhibiteur particulier est nécessaire, P0013J ou P0013K peuvent être sélectionnés. P0013J est compatible avec le dosage de l'activité enzymatique et la détection de petites molécules dans la plupart des cas, mais pour des enzymes ou des petites molécules spéciales, les utilisateurs doivent vérifier la compatibilité par eux-mêmes. La capacité de lyse de P0013J est plus faible que celle de P0013K, mais P0013J est généralement plus compatible avec les études sur les enzymes et les petites molécules.
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