ウルトラSYBRミックス - 低ROX

Cat. No.: U665694

グレード＆純度 Low ROX

Storage

凍結・解凍の繰り返しを避け、-20℃で保存する。

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アイスチェスト＋アイスパッド

概要

製品内容

U665694	成分	1 mL	5 mL	40 mL	貯蔵
U665694A	2×UltraSYBRミクスチャー（低ROX）	1 mL	5×1 mL	40×1 mL	-20℃.凍結融解サイクルは避けて下さい。
U665694B	ddH₂O	1 mL	5×1 mL	40×1 mL	-20℃.凍結融解サイクルは避ける。

製品紹介

UltraSYBR Mixture (Low ROX)は、GoldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I 蛍光色素、Mg2+およびLow ROX補正色素を含む2×濃度の色素ベース（SYBR Green I）リアルタイム蛍光定量PCR専用のプレミックスシステムで、操作が簡単で便利です。主にRNA逆転写後のゲノムDNA標的配列およびcDNA標的配列の検出に使用される。

本製品に含まれる蛍光色素SYBR Green Iは、すべての二本鎖DNAに結合することができるため、特定の標識プローブを合成することなく、異なる標的配列の検出に使用することができます。GoldStar Taq DNA Poly-meraseは、化学修飾された新しい高効率のホットスタート酵素で、室温ではポリメラーゼ活性を持たないため、室温でのプライマーとテンプレートの非特異的結合やプライマーの二量化による非特異的増幅を効果的に回避することができ、酵素の活性化は95℃で10分間インキュベートする必要があります。PCRバッファーシステムとホットスタート酵素のユニークな組み合わせにより、非特異的PCR増幅を効果的に抑制し、PCR増幅効率を大幅に向上させます。

本キットに含まれるROX色素は、定量PCR装置のウェル間で発生する蛍光シグナルエラーを補正することができます。本キットに含まれるROX補正色素は含有量が少ないため、低ROXシグナル補正を必要とするABI Prism7500/7500 Fast、Stratagene Mx3000/Mx3005P、Corbett Rotor Gene 3000などの蛍光定量PCR装置に適しています。

製品の特徴

1.新高効率ホットスタート酵素GoldStar Taq DNA Polymeraseと独自のPCRバッファーシステムを採用し、PCRの増幅効率を大幅に向上させ、高感度、高特異性を実現しました。

2.蛍光定量PCRアッセイに適しており、標的遺伝子を正確に定量・検出することができます。

注意事項

1.使用前に上下に回して軽く混合し、なるべく発泡を避け、短時間遠心分離してからご使用ください。

2.本製品は SYBR GreenI 蛍光色素と ROX 染料を含有しておりますので、本製品の保管時や PCR 反応液調製時には強い光を避けて下さい。

3.凍結融解を繰り返すと性能が低下することがありますので、凍結融解は避けて下さい。

4.本製品はプローブ法による蛍光定量PCRには使用できません。

5.反応液を調製する際は、コンタミネーションをできるだけ防ぐため、チップや遠心チューブは新品または汚染されていないものをご使用ください。

使用方法

以下に示す使用例は、従来の PCR 反応系および反応条件であり、実際の操作においては、鋳型、プライマー構造、 ターゲットフラグメントサイズなどに応じて改良・最適化する必要があります。

1.PCR反応系

試薬	50 μl 反応系	最終濃度
2×UltraSYBRミクスチャー（低ROX）	25 μl	1×
フォワードプライマー，10 µM	1 μl	0.2 μM ¹⁾⁾ 1 μl
リバースプライマー，10 µM	1 μl	0.2 µM ¹⁾ ⁾ µM
テンプレートDNA	2 µl ²⁾⁾（2μl
ddH₂O	50μlまで

注：1）通常、プライマー濃度は0.2μMでより良好な結果が得られ、最終濃度0.1〜1.0μMを範囲設定の参考とすることができる。

(2) DNA鋳型の量は、通常10-100ngゲノムDNAまたは1-10ng cDNAを基準とする。異なる生物種の鋳型は標的遺伝子のコピー数が異なるため、鋳型を勾配希釈して最適な鋳型量を決定することができる。

(3) 推奨反応系は 50 μl であり、実際の実験ニーズに応じて反応系を増減することができる。

2.PCR反応プログラム

注意本製品の前変性反応は95℃、10分間で終了して下さい！

プログラムの設定には下表に示す2段階PCRを使用することを推奨します。このプログラムはABI7500蛍光定量PCR装置を例としています。もし、プライマーのTm値が低いなどの理由で、良い実験結果が得られない場合は、3段階PCR増幅を試してみてください。3段階の手順は、反応条件の最適化で詳しく説明しています。

注：1）本製品で使用するホットスタート酵素は、予備変性95℃、10分の条件下で酵素を活性化させること。

(2）アニーリング温度の設定範囲は60～64℃を目安とし、非特異的反応が生じた場合はアニーリング温度を高くして下さい。

(3) 本プログラムは ABI7500 Fluorescence PCR 装置を基準に設定しています。融解曲線の解析には、ご使用の蛍光 PCR 装置が推奨するプログラムを設定してください。

反応条件の最適化

蛍光定量反応条件の最適化では、プライマー濃度、アニーリング温度、伸長時間などを考慮し、反応の特異性や増幅効率を向上させる必要がある。

1.反応特異性および増幅効率の高い実験系は、以下の条件を備えている必要がある：

(1）高い反応特異性：プライマーダイマーのような非特異的増幅のないネガティブコントロール、標的断片以外の増幅がない。

2）高い増幅効率：低いCt値、理論値100%に近い高いPCR増幅効率。

2.反応条件の最適化方法

1) プライマー濃度：通常、プライマー濃度は0.2μMでより良い結果が得られ、最終濃度0.1～1.0μMを範囲設定の参考とすることができる。反応の特異性を高めたい場合はプライマー濃度を下げ、増幅効率を高めたい場合はプライマー濃度を上げ、反応系を最適化すればよい。

2) アニーリング温度：反応にはアニーリング温度60℃の2段階PCRを用いることが推奨される。反応の特異性を上げたい場合はアニーリング温度を上げることができ、60〜64℃を設定範囲の目安とする。Tm値の低いプライマーを使用するなどして、実験結果がうまく得られない場合は、3段階PCR増幅を試みることができ、3段階法のアニーリング温度は、56℃〜64℃を設定範囲の目安としてください。

3)伸長時間：2-step PCRで伸長時間1分で反応させることをお勧めします。増幅効率を上げたい場合は、伸長時間を長くするか、3-step PCRを試してみて下さい。

注意本品の前変性反応は95℃、10分間で終了させる必要があります！

3ステップ蛍光定量PCR（このプログラムはABI7500蛍光定量PCR装置に基づいています。）

注）1）本品で使用するホットスタート酵素は、予備変性 95℃、10 分の条件下で酵素を活性化させること。

2）目的の増幅効率が得られない場合はアニーリング温度を適切に下げ、非特異的な反応が起こる場合はアニーリング温度を上げる。

3）反応の増幅効率を上げる必要がある場合は、伸長時間を適宜長くします。

4）本プログラムは ABI 7500 Fluorescence PCR 装置を基準として設定されていますので、融解曲線解析につ いては使用する蛍光定量 PCR 装置が推奨するプログラムを設定してください。

仕様

仕様と純度

低ROX

保管条件

凍結・解凍の繰り返しを避け、-20℃で保存する。

入荷

アイスチェスト＋アイスパッド

Product Line

生物製品

よくある質問

How should this product be stored?

Store at ?20 °C. Avoid repeated freeze–thaw cycles. Aliquot into single-use volumes before freezing.

How is this product shipped?

This product ships in an insulated container with ice pads. Unpack on arrival and transfer it to the storage condition stated above.

What documentation is provided?

Available product documentation, including Certificates of Analysis (COA), Safety Data Sheets (SDS), and specification sheets, is shown in the product document area. Document availability and access follow the current site policy.