La ADN polimerasa Bst 6.0 de Aladdin es un homólogo de la ADN polimerasa Bst, fragmento grande, que se deriva del Bacillus stearothermophilus (Bst). Comparada con el fragmento grande de la Bst ADN Polimerasa, la Bst 6.0 ADN Polimerasa tiene mayor actividad de polimerización de ADN 5'→3', mayor capacidad de desplazamiento de hebra, tolerancia al dUTP, a la sal y a los detergentes no iónicos. Este producto no posee actividades de exonucleasa 5'→3' y 3'→5' y puede utilizarse en diversas aplicaciones como la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP), la amplificación por cebado cruzado (CPA), la amplificación por círculo rodante (RCA) y las reacciones de amplificación isotérmica basadas en RCA. Su temperatura óptima de trabajo para la amplificación isotérmica es generalmente entre 50-68℃, típicamente a 65℃, que depende de los cebadores y el ADN molde utilizado, y necesita ser optimizado a través de experimentos.Definición de la unidad
Aplicación：
Amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP), amplificación de cebadores cruzados (CPA), amplificación por círculo rodante (RCA), amplificación isotérmica por helicasa (HDA) y otras amplificaciones isotérmicas de ADN, amplificación por desplazamiento múltiple (MDA), síntesis de ADN con desplazamiento de hebra, amplificación de genoma completo (WGA), secuenciación de ADN con alto contenido de GC, secuenciación rápida de plantillas de ADN a nivel de nanogramo, preparación de bibliotecas para secuenciación de ADN, etc.Tampón de almacenamiento de enzimas: 10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 0,1mM EDTA, 1mM DTT, 0,1% Triton X-100, 50% Glicerol (pH 7,5 a 25℃）10X Bst 6,0 Tampón de reacción: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl, 100mM (NH4)2SO4, 20mM MgSO4, 1%Tween-20 (pH 8,8 a 25℃).Desnaturalización o inactivación: La ADN polimerasa Bst 6.0 puede inactivarse calentándola a 80°C durante 20 minutos.Fuente：
Expresada recombinantemente y purificada a partir de E. coli.Pureza: Libre de endonucleasa y exonucleasa de ADN.Aplicaciones: Amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP), amplificación por cebador cruzado (CPA), amplificación por círculo rodante (RCA), amplificación isotérmica por helicasa (HDA) y otras amplificaciones isotérmicas de ADN, amplificación por desplazamiento múltiple (MDA), síntesis de ADN con desplazamiento de hebra, amplificación del genoma completo (WGA), secuenciación de ADN con alto contenido de GC, secuenciación rápida de plantillas de ADN de nivel nanométrico, preparación de bibliotecas para secuenciación de ADN, etc.Tampón de almacenamiento de enzimas：
10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 0,1mM EDTA, 1mM DTT, 0,1% Triton X-100, 50% Glicerol (pH 7,5 a 25℃）10X Bst 6,0 Tampón de reacción: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl, 100mM (NH4)2SO4, 20mM MgSO4, 1%Tween-20 (pH 8,8 a 25℃).Desnaturalización o inactivación: La ADN polimerasa Bst 6.0 puede inactivarse calentándola a 80°C durante 20 minutos.Precauciones：
Bst 6.0 DNA Polymerase no posee actividad 5'-＞3' exonucleasa.La temperatura para la amplificación isotérmica no debe superar los 70°C. De lo contrario, la enzima se inactivará.Bst 6.0 DNA Polymerase no se puede utilizar para la secuenciación de ciclo térmico o PCR.Siempre establecer un control negativo sin ADN molde para cada experimento de amplificación isotérmica para excluir la amplificación de fondo.Este producto debe mantenerse en hielo durante su uso, y se almacena a -20 ° C inmediatamente después de su uso.Este producto es sólo para R&D. Para su seguridad y salud, por favor use una bata de laboratorio y guantes desechables durante la operaciónInstrucciones de uso：
1. Diseño de cebadoresPara el diseño de cebadores de amplificación isotérmica mediada por bucle, consulte http://primerexplorer.jp/e/ y se recomienda la versión V5. El manual puede descargarse en http://primerexplorer.jp/e/v5_manual/index.html. Consulte este manual para la selección preliminar de cebadores de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP), y los cebadores más adecuados deben verificarse mediante experimentos. Los cebadores LAMP constan de 4 o 6 cebadores (incluido el bucle). Se recomienda diseñar 6 cebadores para el experimento.2prepare las reacciones de LAMP en hielo de la siguiente manera:ReactivoVolumenConcentración finalAgua libre de nucleasas (, ST876)(15,6-x)μl-10X Bst 6.0 Tampón de reacción2,5μl1XMgSO4 (100mM) 1,5μl6mM (8mM total)dNTP (25mM cada uno) (, D7373)1,4μl1,4mM cada unoFIP/BIP Primers (25X, 40μM)1μl1.6μMF3/B3 Primers (25X, 5μM)1μl0,2μMLoop F/B Primers (25X, 10μM)1μl0,4μMTemplatexμl＞ 10 copias o másBst 6.0 DNA Polymerase (40U/μl)1μl1600U/mlVolumen total25μl-Nota 1: Tras preparar la reacción, añada 1μl de SYBR Green I de alta concentración a cada tubo. Tras la amplificación isotérmica, centrifugar a 8.000×g durante 1 min, las reacciones positivas se vuelven verde fluorescente, mientras que las negativas permanecen incoloras o marrones. Incluso sin indicadores, las reacciones positivas pueden identificarse por la turbidez de las reacciones. Las reacciones negativas son claras y transparentes.Nota 2: Para optimizar la reacción, ajuste la concentración de Mg2+ (4-10mM), la cantidad de enzima (0,04-0,32U/μl) o cambie la temperatura de reacción (50-68℃).Nota 3: Si el análisis se realiza mediante electroforesis en gel de agarosa u otros métodos que requieran abrir el recipiente de reacción de LAMP, configure áreas y equipos de análisis auxiliares para evitar la contaminación.Nota 4: Para asegurar la reproducibilidad del experimento, se recomienda añadir el ADN molde al final.Nota 5: Se recomienda encarecidamente establecer un control negativo sin molde para confirmar la especificidad de las amplificaciones.Nota 6: Para evitar la contaminación, la mezcla de reacción se debe mezclar con el ADN molde: Para evitar la contaminación, la mezcla de reacción debe prepararse en un banco limpio.Nota 7: La preparación de reactivos y ADN molde debe realizarse en zonas diferentes de la zona de electroforesis para evitar la contaminación.3. Incubar a 65℃ durante 60 minutos.4. Incubar a 80℃ durante 20min para finalizar la reacción.5. Si es necesario, examinar los productos de reacción mediante electroforesis en gel de agarosa al 2,0%. Los productos de amplificación deben mostrar un patrón de bandas en forma de escalera.Nuestra guía de selección de calidades cubre la pureza, el estado del estabilizador y la idoneidad de la aplicación para todas las variantes de nuestro catálogo.
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