Laboratory Protocols & SOPs Library

Detection of IL-18

Summary

Newly synthesized IL-18 is a precursor molecule to the signal peptide, which is enzymatically cleaved in order to activate it. In this ELISA method, in order to detect only mature (activated) IL-18, the coated antibody must be specific for activated IL-18. Some cells (e.g., human P B M C ) can also secrete IL-18 precursors under normal conditions, and culture supernatants from these cells can be used to detect one or both forms of IL-18. mixtures of anti-human or mouse IL-18 monoclonal antibodies can be used to detect the IL-18 precursor and/or mature form. In this protocol, the antibody to human IL-18 is specific for activated IL-18 only, and the anti-mouse IL-18 antibody detects both forms of mouse IL-18.

Operation method

Detection of IL-1 8

Move

basic program Material E L I S A 包 被 抗 体 (MBLInternational) ••小鼠抗人IL-18单 抗 (克 隆 125-2H ) 或大 鼠抗小鼠IL-18单 抗 (克 隆 74) V P B S , p H 7. 4 洗液: Dulbecco 磷 酸 缓 冲 盐 水 (D -P B S ,如 Life Technologies) 含 0.01% ( V A O Tween 2 0 ; 室温可保存1 周 。 封闭液: D ~P B S 含 1 % 牛 血 清 白 蛋 白 (B S A ); 4°C 可保 存 4 周 IL-18 参 考 标 准 (M B L Intemational) V 检测缓冲液 含 IL-18的待测样本 过氧化物酶标记的大鼠抗人IL-18单 抗 (159-12B , MBLInternational) 或过氧化 物酶标记的大鼠抗小鼠IL-18单 抗 (93-10C , MBLInternational) V 偶联缓冲液 检 测 过 氧 化 物 酶 的 显 色 底 物 ,如 四 甲 基 对 二 氨 基 联 苯 (tetramethylbenzidine, T M B ) /H 2O 2 (Becton Dickinson),按厂商说明书配制 适当的终止液,如 2mol/L 硫酸 多通道移液器和分液器 检测板: 9 6 孔 E I A 板 和 板 盖 (如 Costar的 EIA/R I A 板) E L I S A 读 板 仪 (如 Benckmark, Bio-Rad) 和适合底物颜色的滤光片 1 . 融 化 E L I S A 包被抗体储存液。用 p H 7. 4 的 P B S 稀释抗体到5/xg/ml (小鼠抗人IL-18 单抗,克 隆 125-2H ) 或 15/xg/ml (大鼠抗小鼠IL-18单抗 ,克 隆 74)。 2 . 用多通道移液器,立即向检测板中加入稀释的包被抗体,每孔100//1。加 盖 4°C 包被 过夜。
3 . 洗 板 4 次 :快速吸去或倒去孔内容物,再加满洗液。 4 . 每 孔 加 200/xl封闭液, 37°C孵 育 I h 或 4°C放置过夜。 5 . 用检测缓冲液稀释IL-18参考标准品到lOOOpg/m l 。取 5 支 1.5m l 微量离心管, 2 倍 稀释标准品到31. 2pg/ml。 6 . 用检测缓冲液稀释待测样本。样本起始浓度应为1〇〇 〜l〇〇〇pg/m l 。取 5 个 1.5m l 微 量离心管, 2 倍稀释样本。 样 本 来 源 不 同 ,稀 释 度 也 不 同 。研 究 者 可 根 据 经 验 或 做 预 实 验 加 以 确 定 。 7 . 如 步 骤 3 , 洗涤抗体包被的检测板4 次。 8 . 每 孔 加 IOOm I稀释的IL-18标准品或稀释的样本,每个稀释度加2 孔 。至少另有2 孔 各 加 100/^1检测缓冲液以决定背景。室 温 (20〜25°C ) 放 置 2h 。如步骤3 , 洗涤检测 板 4 次 。 9 . 用偶联缓冲液稀释过氧化物酶标记抗体(159-12B 或 93-10C ) 到 0.5Mg/m l 。每孔加 IOOm I,室 温 (20〜25°C ) 放 置 2h 。如 步 骤 3 ,洗涤检测板4 次 。 10 . 最后一次洗板后,立即向每孔加入100^1显色底物,室温放置30min。 1 1 . 每孔加入IOOiUl终止液,室温中, 30m i n 内 在 E L ISA读板仪上读板,根据底物特点 选择适当的滤光片。 1 2 . 根据标准品的光吸收值(O D ) 绘制标准曲线(O D 值 对 IL- 1 8的 pg/m l绘图)。 根据标 准曲线计算待测样本中IL- 1 8的 含 量 (细胞因子ELISA的结果计算见单元5. 2)。


For more product details, please visit Aladdin Scientific website.

https://www.aladdinsci.com/

Categories: Laboratory Protocols & SOPs Library
Explore topics: Immunological experiments

Da — when not otherwise indicated, molecular weight units are daltons.   Mw — weight-average molecular weight.   Mn — number-average molecular weight.

Products are supplied for research and development use only. Not for use in humans, animals, diagnosis, or therapy.

Cite this article

Aladdin Scientific. "Detection of IL-18" Aladdin Knowledge Base, updated 9 jun 2025. https://www.aladdinsci.com/eu_es/faqs/detection-of-il-18-en.html
Was this article helpful? Yes No 14 out 36 found this helpful

¿Quieres que te enviemos un mensaje cuando tengamos descuentos disponibles?

Recordármelo más tarde

¡Gracias! Por favor, revisa tu bandeja de entrada de correo electrónico para confirmar.

¡Vaya! Las notificaciones están desactivadas.