O PI é um reagente de coloração nuclear que pode corar o ADN. Tal como o EB, o PI intercala-se no ADN de cadeia dupla e liberta fluorescência vermelha. É frequentemente utilizado para a deteção de apoptose ou necrose e para a análise por citometria de fluxo. Embora o PI não possa atravessar as membranas das células vivas, pode atravessar as membranas das células danificadas para corar os núcleos. O PI é frequentemente utilizado com Calceína, AM, Hoechst 33258 ou Hoechst 33342, etc. Pode corar células vivas e mortas ao mesmo tempo. Os comprimentos de onda de excitação e de emissão do complexo PI-DNA são de 535 nm e 615 nm, respetivamente.
Processo de coloração
(1) Preparar uma solução de PI 10-50μM com PBS ou tampão adequado.
(2) Adicionar 1/10 do volume do meio ao meio de cultura celular (a concentração 1/10 do tampão PI também pode ser usada para substituir o meio).
(3) Incubar as células a 37°C durante 10-20 minutos.
(4) Lavar as células duas vezes com PBS ou um tampão adequado.
(5) Observar as células num microscópio de fluorescência com um filtro de comprimento de onda de excitação de 535 nm e um filtro de comprimento de onda de emissão de 615 nm.
Condições de armazenamento: Armazenar a -20°C, seco e escuro, válido por um ano.
Precauções
A MSDS mostra que o iodeto de propídio PI é o mesmo que EB mutagénico para as células germinativas e é cancerígeno. É necessário ter o máximo cuidado para o proteger!
O iodeto de propídio PI é um mutagénico das células germinativas; os testes in vitro revelaram efeitos mutagénicos!
I2615772