o UltraBio™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) da aladdin''s é utilizado para carregar amostras de proteínas em géis SDS-PAGE para eletroforese. Contém um reagente fluorescente seguro e não tóxico que cora as proteínas a roxo durante o processo de ebulição e emite fluorescência laranja sob luz UV ou azul. A coloração e a descoloração dos géis SDS-GAGE após a corrida são eliminadas. Este produto não é perigoso e é fácil de utilizar. Adicione 1/4 do volume deste produto à sua amostra de proteína, misture bem e ferva a 95-100ºC durante 5 minutos. As proteínas são então coradas de púrpura e emitem uma fluorescência laranja. As moléculas fluorescentes pequenas e não carregadas contidas no UltraBio™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) não afectam a taxa de migração das proteínas e o padrão de eletroforese resultante. As proteínas com mais de 500ng podem ser observadas diretamente a olho nu. A fluorescência de proteínas em pequenas quantidades pode ser observada na câmara escura utilizando luz UV ou azul. Este produto é compatível com aplicações de western blotting. As proteínas no gel SDS-PAGE podem ser transferidas para membranas de PVDF ou nitrocelulose após eletroforese. A banda púrpura ou a fluorescência laranja das proteínas também podem ser observadas na membrana após a transferência. A sensibilidade da deteção de Western Blot não é afetada por este produto, o que foi confirmado através do teste de uma variedade de anticorpos normalmente utilizados. A possibilidade de afetar a deteção de determinadas proteínas não pode ser excluída. O fundo do gel após a eletroforese é baixo e o corante fluorescente livre não afecta a observação e a deteção de proteínas. O corante fluorescente livre e o corante de rastreio azul de bromofenol comigram em conjunto para a extremidade do gel para garantir um fundo limpo do gel. Este produto tem alta sensibilidade e pode detetar proteínas até 25ng. Uma única banda proteica com mais de 500 ng pode ser observada a olho nu (Figura 1) e uma banda proteica de 200 ng é fracamente visível. Sob luz UV ou azul, podem ser observadas proteínas com mais de 25 ng (figura 2). Este produto é compatível com os sistemas tampão de gel Tris-Glicina e Hepes habitualmente utilizados. A fluorescência das proteínas nos géis SDS-PAGE é estável a 4ºC durante pelo menos 5 horas. Se transferido imediatamente após a eletroforese, a fluorescência da proteína nas membranas é estável a 4ºC durante pelo menos 24 horas.Principais aplicações
Aplicação：
Comparação aproximada da quantidade de proteína em cada pista, especialmente para deteção de amostras de tecido usando Western Blot; Exame rápido e conveniente da indução, expressão e purificação de proteínas.Figura 1. Resultado da coloração de diferentes quantidades de BSA com o InstantView™ Protein Staining and Loading Buffer (5X). Misturar diferentes quantidades de proteínas BSA, como indicado na figura, com uma quantidade apropriada deste tampão de carga, ferver a 100ºC durante 5 min, seguido de eletroforese. Esta fotografia foi tirada imediatamente após a eletroforese. A banda de 500 ng pode ser observada obviamente a olho nu e a banda de 200 ng de proteína é fracamente visível.Figura 2. Imagens de amostras de proteínas obtidas com o InstantView™ Protein Staining and Loading Buffer (5X) em géis SDS-PAGE. A e B. Misturar diferentes quantidades de proteínas BSA, como indicado na figura, com a quantidade apropriada deste tampão de carga, ferver a 100ºC durante 5 min, seguido de eletroforese. A fotografia A foi tirada imediatamente após a eletroforese sob luz UV e a fotografia B foi tirada imediatamente após a eletroforese sob luz azul. C. Resultado da coloração do lisado de células bacterianas induzido por IPTG para expressar uma proteína-alvo de 35 kD. A fluorescência foi observada sob luz UV (esquerda) após a eletroforese ou sob luz azul (meio). O resultado da coloração com Coomassie Brilliant Blue é mostrado à direita.Lista de Embalagem：ItemComponenteQuantidadeP0280-1Corante de coloração de proteínas InstantView™Para 1mlP0280-2Tampão de carregamento de proteínas InstantView™ (5X)1mlManual-1 cópiaCondições de Armazenamento：Armazenar a -20℃ por até 1 ano. Armazenar a 4 ℃ por até 3 meses. Armazenar à temperatura ambiente por até 2 semanas. O corante de coloração de proteínas InstantView ™ é sensível à luz e deve ser protegido da luz.Precauções：O pH mais baixo afeta significativamente a coloração de proteínas pelo InstantView ™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer. Quando o pH das amostras de proteína é inferior a 5, recomendamos ajustar o pH para mais de 7. A maioria dos padrões de peso molecular de proteína pré-colorada e não pré-colorada são incompatíveis com este produto. Os padrões de peso molecular de proteína não pré-colorada sem qualquer tampão de carga ou dissolvidos em água ou soro fisiológico podem ser misturados com uma quantidade adequada de InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) para produzir padrões de peso molecular de proteína que emitem fluorescência laranja.As proteínas coradas por este produto não são recomendadas para sequenciação subsequente de proteínas, perfil de proteínas ou preparação de anticorpos.InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) deve ser mantido a -20℃ no escuro. O seu desempenho de coloração reduz-se após 2-3 semanas à temperatura ambiente devido à oxidação, que pode ser evitada adicionando DTT no tampão de carregamento a uma concentração não superior a 20mM.Este produto é perigoso. Este produto é perigoso e deve ser manuseado com cuidado para evitar a inalação ou o contacto direto com o corpo humano. Para sua segurança e saúde, por favor use uma bata de laboratório e luvas descartáveis durante a operação.
Precauções：
O pH mais baixo afecta significativamente a coloração de proteínas pelo InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer. Quando o pH das amostras de proteínas é inferior a 5, recomendamos o ajuste do pH para mais de 7. A maioria dos padrões de peso molecular de proteínas pré-colhidas e não pré-colhidas são incompatíveis com este produto. Os padrões de peso molecular de proteínas não pré-contaminadas, sem quaisquer tampões de carga ou dissolvidos em água ou solução salina, podem ser misturados com uma quantidade adequada de InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) para produzir padrões de peso molecular de proteínas que emitem fluorescência laranja.As proteínas coradas por este produto não são recomendadas para sequenciação subsequente de proteínas, perfil de proteínas ou preparação de anticorpos.InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) deve ser mantido a -20℃ no escuro. O seu desempenho de coloração reduz-se após 2-3 semanas à temperatura ambiente devido à oxidação, que pode ser evitada adicionando DTT no tampão de carregamento a uma concentração não superior a 20mM.Este produto é perigoso. Este produto é perigoso e deve ser manuseado com cuidado para evitar a inalação ou o contacto direto com o corpo humano. Para sua segurança e saúde, por favor use uma bata de laboratório e luvas descartáveis durante a operação.
Instruções de utilização：
1. Prepare o InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X).a. Centrifugue o InstantView™ Protein Staining Dye para o fundo do tubo a 5.000-10.000g durante 10-20 segundos.b. Descongele o InstantView™ Protein Loading Buffer (5X) à temperatura ambiente. O SDS contido no tampão de carregamento precipita quando armazenado congelado, mas será resolubilizado à temperatura ambiente.c. Adicione 1 ml de tampão de carregamento de proteínas InstantView™ (5X) ao corante de coloração de proteínas InstantView™, misture e dissolva bem o corante para gerar o tampão de coloração e carregamento de proteínas InstantView™ SDS-PAGE (5X).Nota: O InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) preparado deve ser utilizado imediatamente ou pode ser conservado a -20℃ no escuro até 2 meses.2misture o Protein Staining and Loading Buffer (5X) e as amostras de proteína numa proporção de 1:4. Por exemplo, adicionar 4µl de Protein Staining and Loading Buffer (5X) a 16µl de amostra de proteína. 3. Ferver a mistura a 95-100ºC durante 5 minutos, que podem ser prolongados até 10-15 minutos quando necessário para garantir que o ADN do genoma das amostras de tecidos ou células é completamente quebrado para evitar o aparecimento de materiais pegajosos. Um tempo de aquecimento prolongado pode também garantir a desnaturação adequada das proteínas e melhorar os resultados da coloração nos casos em que os resultados da coloração não são satisfatórios.4. Colocar as amostras nos poços de SDS-PAGE depois de arrefecer até à temperatura ambiente.5. Se forem necessários padrões de peso molecular de proteínas, os padrões de peso molecular de proteínas não coradas sem quaisquer tampões de carga ou dissolvidos em água, soro fisiológico ou PBS podem ser misturados com uma quantidade adequada do InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) para produzir padrões de peso molecular de proteínas após a fervura. 6. Após a eletroforese, coloque o gel sem placas de vidro num transiluminador UV para visualizar imediatamente as bandas, mas se utilizar luz azul para a observação, não é necessário retirar as placas de vidro. Nota 1: O sinal da proteína fluorescente diminui gradualmente à medida que o tempo de exposição aos raios UV aumenta.Nota 2: As proteínas nos géis também podem ser coradas com Coomassie Brilliant Blue, como a Coomassie Blue Staining Solution ( InstantBlue Coomassie Staining Solution ( SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X).A maioria dos padrões de peso molecular de proteínas pré-coloração e não pré-coloração não são compatíveis com o InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X). 2. Estabilidade do InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X).O InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) é facilmente oxidado e deve ser utilizado no prazo de um mês após a preparação. Quando armazenado à temperatura ambiente, deve ser utilizado no prazo de uma semana. Quando o desempenho da coloração diminui, o DTT não superior a 20 mM ou o TCEP não superior a 2 mM como reagente redutor podem normalmente recuperar o desempenho da coloração. 3. Existem precipitados no InstantView™ Protein Loading Buffer (5X) e no InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) quando armazenados no frio.O InstantView™ Protein Loading Buffer (5X) e o InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X) contêm SDS que precipita quando armazenado congelado, mas será resolubilizado à temperatura ambiente.4a quantidade de InstantView™ Protein Staining Dye é, de facto, tão pequena que não pode ser vista a olho nu.5. As modificações pós-traducionais da proteína afectam a sua coloração com InstantView™ Protein Staining and Loading Buffer (5X)? Não, as modificações pós-traducionais não têm qualquer efeito na coloração da proteína. 6. Qual é o comprimento de onda ótimo para a excitação de bandas de proteínas executadas com o InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X)? O comprimento de onda ótimo da luz de excitação é 560nm; no entanto, podem ser utilizados os seguintes comprimentos de onda: 254, 312, 335, 488 e 520nm. Em geral, quanto maior for o comprimento de onda destas luzes de excitação, melhor será a excitação.7. O tampão de carregamento SDS-PAGE (5X) continua a ser necessário para amostras de proteínas que tenham sido misturadas com o tampão de carregamento e coloração de proteínas InstantView™ SDS-PAGE (5X)? Não, o tampão de carregamento e coloração de proteínas InstantView™ SDS-PAGE (5X) actua como corante de carregamento e corante de visualização de proteínas.
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