Tampão de carregamento e coloração de proteínas UltraBio™ SDS-PAGE

Cat. No.: S751602

GRADE & PURITY 5X, Odorless

Visão geral

O UltraBio™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, inodoro) da Aladdin é utilizado para carregar amostras de proteínas em géis SDS-PAGE para eletroforese. Contém um reagente redutor inodoro e um corante fluorescente seguro e não tóxico que cora as proteínas a roxo durante o processo de ebulição e emite uma fluorescência laranja sob luz UV ou azul. A coloração e a descoloração dos géis SDS-GAGE após a corrida são eliminadas. Este produto não é perigoso e é fácil de utilizar. Adicione 1/4 do volume deste produto à sua amostra de proteína, misture bem e ferva a 95-100 ℃ durante 5 minutos. As proteínas são então coradas de roxo e emitem fluorescência laranja. As moléculas fluorescentes pequenas e não carregadas contidas no UltraBio™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) não afectam a taxa de migração das proteínas e o padrão de eletroforese resultante. As proteínas com mais de 500 ng podem ser observadas diretamente a olho nu. A fluorescência de proteínas em pequenas quantidades pode ser observada numa sala escura utilizando luz UV ou azul. Este produto é compatível com aplicações de western blotting. As proteínas no gel SDS-PAGE podem ser transferidas para membranas de PVDF ou nitrocelulose após eletroforese. A banda púrpura ou a fluorescência laranja das proteínas também podem ser observadas na membrana após a transferência. A sensibilidade da deteção de Western Blot não é afetada por este produto, o que foi confirmado através do teste de uma variedade de anticorpos normalmente utilizados. A possibilidade de afetar a deteção de determinadas proteínas não pode ser excluída. O fundo do gel após a eletroforese é baixo e o corante fluorescente livre não afecta a observação e a deteção de proteínas. O corante fluorescente livre e o corante de rastreio azul de bromofenol comigram em conjunto para a extremidade do gel para garantir um fundo limpo do gel. Este produto tem alta sensibilidade e pode detetar proteínas até 25ng. Uma única banda proteica com mais de 500 ng pode ser observada a olho nu (Figura 1) e uma banda proteica de 200 ng é fracamente visível. Sob luz UV ou azul, podem ser observadas proteínas com mais de 25 ng (figura 2). Este produto é compatível com os sistemas tampão de gel Tris-Glicina e Hepes habitualmente utilizados. A fluorescência das proteínas nos géis SDS-PAGE é estável a 4ºC durante pelo menos 5 horas. Se for transferida imediatamente após a eletroforese, a fluorescência da proteína nas membranas é estável a 4ºC durante pelo menos 24 horas. Um reagente redutor solúvel em água, inodoro e mais estável, com uma capacidade de redução semelhante ao ditiotreitol (DTT) ou 2-mercaptoetanol é usado neste produto, tornando o produto inodoro durante o uso normal ou aquecimento.Principais Aplicações

Aplicação：

Comparação aproximada da quantidade de proteína em cada faixa, especialmente para deteção de amostras de tecido usando Western Blot; Exame rápido e conveniente da indução, expressão e purificação de proteínas.Figura 1. Resultado da coloração de diferentes quantidades de BSA com o InstantView™ Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless). Misturar diferentes quantidades de proteínas BSA, como indicado na figura, com a quantidade apropriada deste tampão de carga, ferver a 100ºC durante 5 min, seguido de eletroforese. Esta fotografia foi tirada imediatamente após a eletroforese. A banda de 500 ng pode ser observada obviamente a olho nu e a banda de 200 ng de proteína é fracamente visível.Figura 2. Imagens de amostras de proteínas obtidas com o InstantView™ Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) em géis SDS-PAGE. A e B. Misturar diferentes quantidades de proteínas BSA, como indicado na figura, com a quantidade apropriada deste tampão de carga, ferver a 100ºC durante 5 min, seguido de eletroforese. A fotografia A foi tirada imediatamente após a eletroforese sob luz UV e a fotografia B foi tirada imediatamente após a eletroforese sob luz azul. C. Resultado da coloração do lisado de células bacterianas induzido por IPTG para expressar uma proteína-alvo de 35 kD. A fluorescência foi observada sob luz UV (esquerda) após a eletroforese ou sob luz azul (meio). O resultado da coloração com Coomassie Brilliant Blue é mostrado à direita.Lista de Embalagem：ItemComponenteQuantidadeP0281S-1Corante de coloração de proteínas InstantView™Para 1mlP0281S-2Tampão de carregamento de proteínas InstantView™ (5X, sem odor)1mlManual-1 cópiaCondições de Armazenamento：Armazenar a -20℃ por até 1 ano, 4℃ por até 3 meses ou temperatura ambiente por até 2 semanas. O corante de coloração de proteínas InstantView ™ é sensível à luz e deve ser protegido da luz.Precauções：As amostras de proteínas após a mistura com o tampão de coloração e carregamento de proteínas InstantView ™ SDS-PAGE (5X, inodoro) devem ser fervidas a 95 ℃ por 5 minutos. Temperatura muito alta (por exemplo, 100 ℃) ou tempo de ebulição muito longo (por exemplo, o InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, inodoro) contém um reagente redutor inodoro, mas com uma capacidade redutora semelhante ao 2-mercaptoetanol tóxico e ao DTT irritante. O InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, inodoro) preparado tem de ser completamente derretido antes da utilização. Quando o pH das amostras de proteínas é inferior a 5, recomendamos o ajuste do pH para um valor superior a 7.A maioria dos padrões de peso molecular de proteínas pré-coloração e não pré-coloração são incompatíveis com este produto. Os padrões de peso molecular de proteínas não pré-coloração, sem quaisquer tampões de carga ou dissolvidos em água ou soro fisiológico, podem ser misturados com uma quantidade adequada de InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) para produzir padrões de peso molecular de proteínas que emitem fluorescência laranja.As proteínas coradas por este produto não são recomendadas para sequenciação subsequente de proteínas, perfil de proteínas ou preparação de anticorpos.InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) deve ser mantido a -20ºC no escuro. O seu desempenho de coloração reduz-se após 2-3 semanas à temperatura ambiente devido à oxidação, que pode ser evitada adicionando DTT no tampão de carregamento a uma concentração não superior a 20mM.Este produto é perigoso. Este produto é perigoso e deve ser manuseado com cuidado para evitar a inalação ou o contacto direto com o corpo humano. Para sua segurança e saúde, por favor use uma bata de laboratório e luvas descartáveis durante a operação.

Precauções：

As amostras de proteína após a mistura com o InstantView ™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) devem ser fervidas a 95 ℃ por 5 minutos. Temperatura muito alta (por exemplo, 100 ℃) ou tempo de ebulição muito longo (por exemplo, o InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Inodoro) contém um reagente redutor inodoro, mas com uma capacidade redutora semelhante ao 2-mercaptoetanol tóxico e ao DTT irritante. O InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Inodoro) preparado tem de ser completamente derretido antes da utilização. Quando o pH das amostras de proteínas é inferior a 5, recomendamos que o pH seja ajustado para um valor superior a 7. A maioria dos padrões de peso molecular de proteínas pré-coloriadas e não pré-coloriadas são incompatíveis com este produto. Os padrões de peso molecular de proteínas não pré-coloração, sem quaisquer tampões de carga ou dissolvidos em água ou soro fisiológico, podem ser misturados com uma quantidade adequada de InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) para produzir padrões de peso molecular de proteínas que emitem fluorescência laranja.As proteínas coradas por este produto não são recomendadas para sequenciação subsequente de proteínas, perfil de proteínas ou preparação de anticorpos.InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) deve ser mantido a -20ºC no escuro. O seu desempenho de coloração reduz-se após 2-3 semanas à temperatura ambiente devido à oxidação, que pode ser evitada adicionando DTT no tampão de carregamento a uma concentração não superior a 20mM.Este produto é perigoso. Este produto é perigoso e deve ser manuseado com cuidado para evitar a inalação ou o contacto direto com o corpo humano. Para sua segurança e saúde, por favor use uma bata de laboratório e luvas descartáveis durante a operação.

Instruções de utilização：

1. Prepare o tampão de coloração e carregamento de proteínas InstantView™ SDS-PAGE (5X, sem odor).a. Centrifugue o corante de coloração de proteínas InstantView™ para o fundo do tubo a 5.000-10.000g durante 10-20 segundos.b. Descongele o tampão de carregamento de proteínas InstantView™ (5X, sem odor) à temperatura ambiente. O SDS contido no tampão de carregamento precipita quando armazenado a frio, mas será resolubilizado à temperatura ambiente.c. Adicione 1 ml de tampão de carregamento de proteínas InstantView™ (5X, sem odor) ao corante de coloração de proteínas InstantView™, misture e dissolva o corante completamente para gerar o tampão de coloração e carregamento de proteínas InstantView™ SDS-PAGE (5X, sem odor).Nota: O InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, inodoro) preparado deve ser utilizado imediatamente ou pode ser conservado a -20ºC, no escuro, até 2 meses.2misturar o Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) e as amostras de proteínas numa proporção de 1:4. Por exemplo, adicionar 4µl de Tampão de Coloração e Carregamento de Proteínas (5X, Inodoro) a 16µl de amostra de proteína. 3. Ferver a mistura a 95ºC durante 5 minutos, que podem ser prolongados para 10-15 minutos quando necessário para assegurar que o ADN do genoma das amostras de tecido ou células é completamente quebrado para evitar o aparecimento de materiais pegajosos. Nota: A fervura das amostras deve ser efectuada a 95ºC. Uma temperatura demasiado elevada (por exemplo, 100ºC) ou um tempo de fervura demasiado longo (por exemplo, mais de 15 minutos) podem provocar a degradação das proteínas ou a aberração do corante de rastreio. 4. 5. Se forem necessários padrões de peso molecular de proteínas, os padrões de peso molecular de proteínas não coradas sem quaisquer tampões de carga ou dissolvidos em água, soro fisiológico ou PBS podem ser misturados com uma quantidade adequada do InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) para produzir padrões de peso molecular de proteínas após fervura. 6. Após a eletroforese, coloque o gel sem placas de vidro num transiluminador UV para visualizar imediatamente as bandas, mas se utilizar luz azul para a observação, não é necessário retirar as placas de vidro. Nota 1: O sinal fluorescente das proteínas diminui gradualmente à medida que o tempo de exposição aos raios UV aumenta. Nota 2: As proteínas nos géis também podem ser coradas com Coomassie Brilliant Blue, como a Coomassie Blue Staining Solution ( InstantBlue Coomassie Staining Solution ( SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless).A maioria dos padrões de peso molecular de proteínas pré-coloração e não pré-coloração não são compatíveis com o InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless). 2. Estabilidade do InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless).O InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless) é facilmente oxidado e deve ser utilizado no prazo de um mês após a preparação. Quando armazenado à temperatura ambiente, deve ser utilizado no prazo de uma semana. Quando o desempenho da coloração diminui, a adição de TCEP não superior a 2 mM como reagente redutor pode normalmente recuperar o desempenho da coloração. 3. Existem precipitados no InstantView™ Protein Loading Buffer (5X, sem odor) e no InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, sem odor) quando armazenados no frio.O InstantView™ Protein Loading Buffer (5X, sem odor) e o InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, sem odor) contêm SDS que precipita quando armazenado congelado, mas será resolubilizado à temperatura ambiente.4a quantidade de corante de coloração de proteínas InstantView™ é de facto tão pequena que não pode ser vista a olho nu.5. As modificações pós-traducionais da proteína afectam a sua coloração com o InstantView™ Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless)? Não, as modificações pós-traducionais não têm qualquer efeito na coloração da proteína. 6. Qual é o comprimento de onda ótimo para a excitação de bandas de proteínas executadas com o InstantView™ SDS-PAGE Protein Staining and Loading Buffer (5X, Odorless)? O comprimento de onda ótimo da luz de excitação é 560nm; no entanto, podem ser utilizados os seguintes comprimentos de onda: 254, 312, 335, 488 e 520nm. Em geral, quanto maior for o comprimento de onda destas luzes de excitação, melhor será a excitação.7. O tampão de carregamento SDS-PAGE (5X, sem odor) continua a ser necessário para amostras de proteínas que tenham sido misturadas com o tampão de carregamento e coloração de proteínas InstantView™ SDS-PAGE (5X, sem odor)? Não, o tampão de carregamento e coloração de proteínas InstantView™ SDS-PAGE (5X, sem odor) actua como corante de carregamento e corante de visualização de proteínas.

Specifications

Product Name

Tampão de carregamento e coloração de proteínas UltraBio™ SDS-PAGE

Especificações e pureza

5X, sem odor

Tipo de molécula

Bioreagents/Buffer

Armazenamento e envio

Concentração

5X, Odorless

Condições de armazenamento de armazenamento

Protegido da luz, conservar a -20°C

Enviado em

Arca de gelo + almofadas de gelo

Estabilidade e armazenamento

Armazenar a -20 ℃ longe da luz, eficaz por um ano. Armazenado a 4 ℃ no escuro, eficaz por 3 meses; Armazenado à temperatura ambiente, válido por 2 semanas.

Perguntas frequentes

How should this product be stored?

Store at ?20 °C, protected from light. The material is light-sensitive — keep it in its original opaque or amber container.

How is this product shipped?

This product ships in an insulated container with ice pads. Unpack on arrival and transfer it to the storage condition stated above.

What documentation is provided?

Available product documentation, including Certificates of Analysis (COA), Safety Data Sheets (SDS), and specification sheets, is shown in the product document area. Document availability and access follow the current site policy.