WELQ Protease

Cat. No.: W751789

GRADE & PURITY 5U/μl

Visão geral

A protease WELQ da Aladdin reconhece especificamente a sequência tetrapeptídica Trp-Glu-Leu-Gln (WELQ) e cliva a ligação peptídica após Gln (Q), que é habitualmente utilizada para remover His N-terminal ou outras etiquetas de proteínas recombinantes, com a vantagem mais proeminente de que o N-terminal da proteína alvo não deixa quaisquer resíduos de aminoácidos adicionais após a clivagem. A protease WELQ é uma proteína do tipo serina protease derivada de Staphylococcus aureus [1,2]. Funciona numa gama de temperaturas relativamente ampla (4-30℃) e numa gama de pH (6,5-9,0) e não necessita de tampões de reação especiais para a sua reação. Esta protease WELQ com His-tag é particularmente adequada para a clivagem na coluna de proteínas alvo com His-tag. Após a clivagem, o His-tag clivado e a protease WELQ ligam-se à His-tag Purification Resin, enquanto a proteína-alvo com o His-tag removido é eluída, o que facilita muito a purificação das proteínas-alvo. Em alternativa, a protease WELQ e a etiqueta removida das proteínas alvo podem também ser removidas utilizando uma coluna de níquel e uma coluna de purificação para as etiquetas correspondentes, respetivamente. Figura 1. Digestão de proteínas marcadas com GST utilizando a protease WELQ da Aladdin e um concorrente. Cinquenta microgramas de proteína de fusão contendo o local de reconhecimento da WELQ Protease (36kD) foram incubados com 1 U e 2 U de WELQ Protease em tampão 50mM Tris-HCl (pH 8,0), respetivamente, a 4 ℃ e 25 ℃. As amostras foram coletadas após diferentes cursos de tempo, conforme indicado na figura, e submetidas à eletroforese em SDS-PAGE, seguida de coloração com Coomassie Brilliant Blue. Os produtos da digestão foram a proteína alvo de ~10kD e a etiqueta GST de ~26kD. Tal como se mostra na figura, este produto tem uma atividade enzimática comparável à de um concorrente amplamente aceite. Esta figura serve apenas de referência, podendo variar devido a diferentes condições experimentais. Esta Protease WELQ tem um peso molecular de aproximadamente 22kDa e uma pureza de ≥95%. É isenta de endonuclease e exonuclease de ADN, RNAase e fosfodiesterase. Definição da unidade

Precauções：

A atividade enzimática da WELQ Protease pode ser parcialmente inibida por ureia 2M ou cloridrato de guanidina 0,25M.Este produto destina-se apenas a I&D. Para sua segurança e saúde, use uma bata de laboratório e luvas descartáveis durante a operação.

Instruções de utilização：

1.Otimização das condições de digestão: A extensão da exposição do local de reconhecimento da WELQ Protease, a sequência de aminoácidos perto do local e o grau de agregação da proteína afectam o efeito de digestão da WELQ Protease. Assim, recomenda-se otimizar as condições de digestão para diferentes proteínas em três aspectos, temperatura de reação (4-30 ℃), tempo de reação (1-12h ou durante a noite) e quantidade de enzima (1: 5-1: 100 U / μg). a.Configure a reação da seguinte forma: Componente Quantidade Proteína Substrato 50μg WELQ Protease (5U/μl)* 0,5/1/2/10U Tampão de Reação** Para 50μl * Definir a proporção de enzima para proteína substrato para 1:100, 1:50, 1:25, e 1:5 (U/μg), respetivamente. Exceto a razão 1:5, recomendamos a diluição da WELQ Protease para 0,5 U/μl antes da utilização.** Recomendamos a utilização de 10-100 mM Tris-HCl (pH 8,0) como Tampão de Reação. b.Incubar a mistura de reação a 15-30℃. Após 1, 3, 6 e 12 horas (ou durante a noite) de reação, respetivamente, retire 10μl do produto da reação para análise SDS-PAGE. Quando o tempo de reação for superior a 16 horas, recomendamos a incubação em temperatura abaixo de 20 ℃ .c.Após a determinação da condição de reação ideal, a reação pode ser ampliada. Para a digestão na coluna, a quantidade de enzima necessária precisa ser otimizada ainda mais.2digestão enzimática em solução e purificaçãoa.Recomendamos a utilização de 10-100mM Tris-HCl (pH8,0), 10-100mM Na3PO4 (pH7,4), ou 10-20mM K3PO4 (pH7,4) como Tampão de Reação.Nota: Se a cromatografia de afinidade for realizada posteriormente, o Tampão de Reação pode conter 50mM NaCl e 5-20mM Imidazole.b.Adicionar WELQ Protease e incubar a 15-30℃. Nota: Se a proteína for instável ou a reação de digestão demorar mais de 16 horas, incubar a reação a 4-20℃.c.Adicionar o produto da reação à Resina de Purificação His-tag ( His-tag Purification Resin10ml P2218 His-tag Purification Resin100ml P2220 His-tag Purification Resin1000ml P2226 His-tag Protein Purification Kit10ml P2229S His-tag Protein Purification Kit10ml P2233-10ml His-tag Purification Resin10ml P2233-100ml His-tag100ml P2233-1000ml Resina de Purificação de His-tag1000ml P2302 PreScission Protease 100U P2303 PreScission Protease 500U P2307 TEV Protease (His-tag) 1000U P2308 TEV Protease (His-tag) 10000U P2310S TEV Protease 1000U P2310M TEV Protease 10000U P2312S SUMO Protease 200U P2312M SUMO Protease 1000U P2312L SUMO Protease 5000U

Specifications

Product Name

WELQ Protease

Especificações e pureza

5U/μl

Tipo de molécula

Enzyme

Armazenamento e envio

Concentração

5U/μl

Condições de armazenamento de armazenamento

Armazenar a -20°C

Enviado em

Arca de gelo + almofadas de gelo

Estabilidade e armazenamento

Armazenar a -20 ℃ durante um período máximo de 2 anos.