EnzymoPure™, 5U/μL EnzymoPure™ for sensitive chromatographic and analytical workflows requiring minimal baseline interference.
Conservar a -20°C Ships Hielera + almohadillas de hielo Check lot-specific COA for exact specifications.
SDS, COA, datasheet, and spec sheet available for download. Lot-specific COA accessible via lot number lookup.
Cited in 0 peer-reviewed publications across chromatography, organic synthesis, and cross-coupling reactions.
Condición de choque térmico: 95 ℃, 2,5min
Actividad de la extasa: 5 '→ 3'
Emparejamiento del sistema de prevención de la contaminación: √
ARMS: √
SNP: √
PCR cuantitativa por fluorescencia: √
Conexión de portadora AT adicional añadida: √
Elementos recomendados: PCR cualitativa, PCR cuantitativa
Manual del producto
Anstart Taq II DNA polymerase es un producto mixto de anticuerpo monoclonal anti-Taq y Taq II DNA polymerase. Es una versión mejorada del producto original Anstart Taq DNA Polymerase (MD006), con mejor estabilidad y especificidad. Antes de calentar a alta temperatura, el anticuerpo monoclonal anti-Taq se une a la Taq polimerasa para inhibir la actividad de la polimerasa, inhibiendo así el recocido inespecífico de los cebadores o la amplificación inespecífica causada por dímeros de cebadores en condiciones de baja temperatura. Cuando el sistema de reacción de amplificación se calienta a 95°C durante 2 minutos, la actividad de la polimerasa se restablece debido a la desnaturalización del anticuerpo monoclonal anti-Taq, por lo que no es necesario un tratamiento especial de inactivación, y puede utilizarse en condiciones convencionales de reacción de PCR. Utilizándolo junto con un tampón mejorado, la activación rápida puede aumentar eficazmente la cantidad de productos de reacción y mejorar la sensibilidad y especificidad de la reacción PCR. Puede aplicarse a la PCR de arranque en caliente para amplificar plantillas complejas y fragmentos diana poco copiados.
Contenido del producto
1. Anstart Taq II ADN polimerasa ( 5 U/μl )
2. 10×Anstart Taq II Buffer (sin Mg2+ )
3. 100mM MgCl2
Uso del producto
El método de arranque en caliente se utiliza para la amplificación por PCR.
Instrucciones
1. Configuración del sistema de reacción PCR
a. Disuelva y mezcle las distintas soluciones necesarias para la reacción PCR y colóquelas en un baño de hielo o en una nevera. Se recomienda utilizar alícuotas del líquido de PCR de reacción para evitar la congelación y descongelación repetidas.
b. Consulte la siguiente tabla para configurar la reacción PCR. Se recomienda configurar el sistema de reacción PCR en un baño de hielo o en una caja de hielo:
Reactivo | Volumen | Concentración final |
5×Anstart Taq II Buffer (Mg2+ Plus) | 10μl | 1× |
dNTP（25mM cada uno） | 0.4μl | 0.2mM |
ADN plantilla | 10μl | - |
Cebador I（10μM） | 1μl | 0.2μM |
Primer II（10μM） | 1μl | 0.2μM |
Anstart Taq II ADN polimerasa ( 5 U/μl ) | 0.5μl | - |
Agua ultrapura | Hasta 50μl | - |
Capacidad total | 50μl | - |
La dosificación recomendada para diferentes tipos de plantillas en un volumen de reacción de 50μl es la siguiente:
ADN genómico de mamíferos: 0,1-1μg
ADN genómico de Escherichia coli: 10-100ng
ADN plasmídico: 0,1-10ng
Un exceso de ADN molde puede dar lugar fácilmente a productos PCR inespecíficos
c. Utilizar una pipeta para mezclar suavemente o un Vortex suave para mezclar, y centrifugar durante unos segundos a temperatura ambiente para permitir que el líquido se acumule en el fondo del tubo.
d. Coloque cada juego de tubos de reacción PCR en la máquina PCR para iniciar la reacción PCR.
2. El ajuste de los parámetros de la reacción PCR toma como ejemplo la amplificación de un fragmento diana de 1Kb
Paso | Temperatura | Tiempo | Número de ciclos |
Predesnaturalización | 95℃ | 2.5min | 1 |
Transexual | 94℃ | 30s |
25-35 |
Recocido | 55℃ | 30s | |
Extienda | 72℃ | 1min | |
Última extensión | 72℃ | 10min | 1 |
a. La configuración de la reacción de PCR debe basarse en la plantilla, los cebadores, la longitud del producto de PCR y el contenido de GC y otras condiciones para establecer diferentes condiciones de reacción de PCR, incluyendo la temperatura, el tiempo y el número de ciclos.
b. El tiempo de STEP4 (extensión) debe ajustarse en función de la longitud del producto PCR, normalmente el tiempo de extensión por producto kb es de 1 min. Por ejemplo, si la longitud del producto PCR es de 1kb, el tiempo de extensión se puede ajustar a 1min, y si la longitud del producto PCR es de 2kb, entonces el tiempo de extensión se puede ajustar a 2min, y así sucesivamente.
c. Para la primera PCR, con el fin de asegurar que el producto PCR esperado pueda amplificarse tanto como sea posible, el número de ciclos puede establecerse en 35. El número de ciclos de la reacción PCR que debe ser semicuantitativa o cuantitativa debe optimizarse adecuadamente para que la reacción PCR alcance la meseta.
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